Avaliação do desempenho de parâmetros imunológicos como indicadores de progressão clínica da infecção crônica pelo HTLV-1 / Evaluation of the performance of immunological parameters as indicators for clinical progression of chronic HTLV-1 infection

Neste estudo, foi avaliado o desempenho isolado e combinado de parâmetros laboratoriais, percentual de linfócitos B ( por centoLB), a razão entre células T/B e o por centoCD8+HLA-DR+/CD8+, na identificação de indivíduos assintomáticos-AS ou portadores de HAM/TSP-HT numa população de casos soropositivos para HTLV-1. índices expressos em porcentagem demonstram que cada parâmetro, isoladamente, apresenta desempenho moderado, com co-negatividade=83 por cento e 91 por cento para por centoLB e razão entre células T/B, respectivamente e co-positividade=78 por cento para por centoCD8+HLA-DR+/CD8+. A análise combinada ( por centoCD8+HLA-DR+/CD8+ e razão T/B) não revelou ganho significativo no desempenho (co-positividade=75 por cento, co-negatividade=74 por cento). A análise das razões de verossimilhança em diferentes faixas de valores, para os parâmetros isolados, revelou que um indivíduo soropositivo para HTLV-1 com por centoLB<7 por cento, razão entre células T/B>11 e por centoCD8+HLA-DR+/CD8+>70 por cento possui, respectivamente, 11, 19 e quase 10 vezes mais chances de pertencer ao grupo HT. Portanto, recomenda-se o uso desses indicadores fenótipos na propedêutica laboratorial complementar de monitoração da progressão clínica da infecção crônica pelo HTLV-1.

This study evaluated the performance of single and combined laboratory parameters, B-lymphocyte percentages ( percentLB), T/B cell ratio and percentCD8+HLA-DR+/CD8+, to differentiate asymptomatic cases (AS) from HAM/TSP patients (HT) within a population of HTLV-1 seropositive cases. Percentage indices demonstrated that each parameter alone presented moderate performance, with co-negativity of 83 and 91 percent for percentLB and T/B cell ratio, respectively, and co-positivity of 78 percent for percentCD8+HLA-DR+/CD8+. Combined analysis ( percentCD8+HLA-DR+/CD8+ and T/B cell ratio) did not show any substantial performance enhancement (co-positivity = 75 percent and co-negativity = 74 percent). Likelihood ratio analysis using different value ranges for the separate parameters revealed that HTLV-1 seropositive cases with percentLB<7 percent, T/B cell ratio>11 and percentCD8+HLA-DR+/CD8+>70 percent would have, respectively, 11, 19 and 10 times greater chance of belonging to the HT group. Therefore, use of these phenotypic indicators as complementary laboratory methods for monitoring the clinical progression of chronic HTLV-1 infection is recommended.

Aplicações da pesquisa de anticorpos IgG anti-formas promastigotas vivas de Leishmania (V. ) braziliensis, por citometria de fluxo, em estudos clínicos da Leishmaniose cutânea localizada / Applications of the research of a flow cytometry to detected anti-live Leishmania (V. ) braziliensis promastigotes IgG antibodies (FC-ALPA-IgG) in clinical studies of the localized cutaneous leishmaniasis

Este estudo se refere ao desenvolvimento de uma nova metodologia,fundamentada na pesquisa de anticorpos IgG anti-formas promastigotas vivas de Leishmania(V.) braziliensis,por citometria de fluxo-AAPV-IgG para diagnóstico e monitoramento de cura da leishmaniose cutânea localizada-LCL.Em uma primeira etapa de padronização do método,ficou estabelecida a nova metodologia que permite discriminar a reatividade de IgG do soro de pacientes portadores de LCL(L+)daquela observada para indivíduos sem manifestação clínica de LCL(L-),empregando-se em cada teste:a)500.000 promastigotas vivas de 10 dias de cultivo in vitro;b)soro teste na diluição 1:1.024;c)anticorpo secundário anti-IgG humano-FITC na diluição 1:400;d)ambas incubações a 37ºC por 30 minutos e)o valor do percentual de parasito fluorescentes positivos-PPFP de 60por cento como ponto de corte entre resultados positivos e negativos.Uma segunda etapa,foi feita a avaliação comparativa do desempenho do método proposto e de um método tradicional,a Reação de Imunofluorescência Indireta-RIFI.A análise dos índices de desempenho...Posteriormente...desempenho da pesquisa AAPV-IgG aplicada ao diagnóstico da LCL,uma vez que podem apresentar resultados falso-negativos e falso-positivos,respectivamente.Considerando a queda no desempenho da AAPV-IgG na identificação de LCL numa amostragem populacional que inclui LV e DC,foi proposta a avaliação do desempenho da quantificação das subclasses de IgG no esclarecimento de situações positivas no teste original.A análise combinada da AAPV-IgG1/IgG2 mostrou-se útil no esclarecimento de situações positivas no teste original, quando aplicado numa amostragem populacional que inclui LV e DC.O estabelecimento do ponto de corte de 60por cento de PPFP para AAPV-IgG1 e de 50por cento de PPFP para AAPV-IgG2 permitiu o esclarecimento de 93por cento das situações AAPV-IgG positivas que não apresentavam LCL e confirmar 100por cento dos casos de LCL em atividade clínica.A análise das RVs demonstrou que um resultado positivo na análise combinada praticamente confirma a presença de LCL e que um resultado negativo praticamente confirma a ausência de LCL.Finalmente,foi demonstrada a utilidade da AAPV-IgG no monitoramento precoce e tardio da cura pós-terapêutica específica da LCL.Observou-se que,71por cento dos pacientes sem recidivas após 2 anos do tratamento foram identificados precocemente(30d-PT), com queda na reatividade de PPFP,superior a 10por cento, na diluição do soro 1:4.096.

Aplicação da pesquisa de anticorpos IgG anti-formas promastigotas vivas de Leishmania (V. ) braziliensis, por citometria de fluxo, em estudos clínicos da Leishmaniose cutânea localizada

Este estudo se refere ao desenvolvimento de uma nova metodologia, fundamentada na pesquisa de anticorpos IgG anti-formas promastigotas vivas de Leishmania (V.) braziliensis, por citometria de fluxo-AAPV-IgG para diagnóstico e monitoramento de cura da leishmaniose cutânea localizada-LCL. Em uma primeira etapa de padronização do método, ficou estabelecida a nova metodologia que permite discriminar a reatividade de IgG do soro de pacientes portadores de LCL(L+) daquela observada para indivíduos sem manifestação clínica de LCL(L-), empregando-se em cada teste: a) 500.000 promastigotas vivas de 10 dias de cultivo; b) soro teste na diluição 1:1.024; c) anticorpo secundário anti-IgG humano-FITC na diluição 1:400; d) ambas incubações a 37ºC por 30 minutos e e) o valor do percentual de parasito fluorescentes positivos-PPFP de 60 porcento como ponto de corte entre resultados positivos e negativos

Em uma segunda etapa, foi feita a avaliação comparativa do desempenho do método proposto e de um método tradicional, a Reação de Imunofluorescência Indireta-RIFI. A análise dos índices de desempenho expressos em percentual (sensibilidade, especificidade, valores preditivos, probabilidade de doença pós-teste negativo, taxa de falso-positivo, acurácia e Índice J de Youden) e a Razão de Verossimilhança-RV demonstrou a melhor performance da AAPV-IgG em relação à RIFI, na identificação de casos de LCL em atividade clínica. A análise das RVs demonstrou que os títulos da RIFI foram desprovidos de valor diagnóstico enquanto que na AAPV-IgG, valores de PPFP>60 porcento contribuem para a confirmação do diagnóstico da LCL e valores de PPFP£60 porcento praticamente excluem o diagnóstico de LCL

Posteriormente, foram feitas simulações com situações clínicas que podem concorrer para falso-positividade ou falso-negatividade do teste em estudo. O tempo de duração da lesão na LCL, casos de leishmaniose visceral-LV e doença de Chagas-DC foram identificados como situações clínicas capazes de interferir no desempenho da pesquisa AAPV-IgG aplicada ao diagnóstico da LCL, uma vez que podem apresentar resultados falso-negativos e falso-positivos, respectivamente. Considerando a queda no desempenho da AAPV-IgG na identificação de LCL numa amostragem populacional que inclui LV e DC, foi proposta a avaliação do desempenho da quantificação das subclasses de IgG no esclarecimento de situações positivas no teste original. A análise combinada da AAPV-IgG1/IgG2 mostrou-se útil no esclarecimento de situações positivas no teste original, quando aplicado numa amostragem populacional que inclui LV e DC.. O estabelecimento do ponto de corte de 60 porcento de PPFP para AAPV-IgG1 e de 50 porcento de PPFP para AAPV-IgG2 permitiu o esclarecimento de 93 porcento das situações AAPV-IgG positivas que não apresentavam LCL e confirmar 100 porcento dos casos de LCL em atividade clínica. A análise das RVs demonstrou que um resultado positivo na análise combinada praticamente confirma a presença de LCL e que um resultado negativo praticamente confirma a ausência de LCL. Finalmente, foi demonstrada a utilidade da AAPV-IgG no monitoramento precoce e tardio da cura pós-terapêutica específica da LCL. Observou-se que, que 71porcento dos pacientes sem recidivas após 2 anos do tratamento foram identificados precocemente (30d-PT), com queda na reatividade de PPFP, superior a 10 porcento, na diluição do soro 1:4.096

Aplicação da pesquisa de anticorpos IgG anti-formas promastigotas vivas de Leishmania (V. ) braziliensis, por citometria de fluxo, em estudos clínicos da Leishmaniose cutânea localizada / Application of antibodies IgG anti-living promastigotes of Leishmania (V. ) braziliensis by flow cytometry in clinical studies of localized cutaneous leishmaniasis

Este estudo se refere ao desenvolvimento de uma nova metodologia, fundamentada na pesquisa de anticorpos IgG anti-formas promastigotas vivas de Leishmania (V.) braziliensis, por citometria de fluxo-AAPV-IgG para diagnóstico e monitoramento de cura da leishmaniose cutânea localizada-LCL. Em uma primeira etapa de padronização do método, ficou estabelecida a nova metodologia que permite discriminar a reatividade de IgG do soro de pacientes portadores de LCL(L+) daquela observada para indivíduos sem manifestação clínica de LCL(L-), empregando-se em cada teste: a) 500.000 promastigotas vivas de 10 dias de cultivo; b) soro teste na diluição 1:1.024; c) anticorpo secundário anti-IgG humano-FITC na diluição 1:400; d) ambas incubações a 37ºC por 30 minutos e e) o valor do percentual de parasito fluorescentes positivos-PPFP de 60 por cento como ponto de corte entre resultados positivos e negativos. Em uma segunda etapa, foi feita a avaliação comparativa do desempenho do método proposto e de um método tradicional, a Reação de Imunofluorescência Indireta-RIFI. A análise dos índices de desempenho expressos em percentual (sensibilidade, especificidade, valores preditivos, probabilidade de doença pós-teste negativo, taxa de falso-positivo, acurácia e Índice J de Youden) e a Razão de Verossimilhança-RV demonstrou a melhor performance da AAPV-IgG em relação à RIFI, na identificação de casos de LCL em atividade clínica. A análise das RVs demonstrou que os títulos da RIFI foram desprovidos de valor diagnóstico enquanto que na AAPV-IgG, valores de PPFP>60 por cento contribuem para a confirmação do diagnóstico da LCL e valores de PPFP£60 por cento praticamente excluem o diagnóstico de LCL. Posteriormente, foram feitas simulações com situações clínicas que podem concorrer para falso-positividade ou falso-negatividade do teste em estudo. O tempo de duração da lesão na LCL, casos de leishmaniose visceral-LV e doença de Chagas-DC foram identificados como situações clínicas capazes de interferir no desempenho da pesquisa AAPV-IgG aplicada ao diagnóstico da LCL, uma vez que podem apresentar resultados falso-negativos e falso-positivos, respectivamente. Considerando a queda no desempenho da AAPV-IgG na identificação de LCL numa amostragem populacional que inclui LV e DC, foi proposta a avaliação do desempenho da quantificação das subclasses de IgG no esclarecimento de situações positivas no teste original. A análise combinada da AAPV-IgG1/IgG2 mostrou-se útil no esclarecimento de situações positivas no teste original, quando aplicado numa amostragem populacional que inclui LV e DC. O estabelecimento do ponto de corte de 60 por cento de PPFP para AAPV-IgG1 e de 50 por cento de PPFP para AAPV-IgG2 permitiu o esclarecimento de 93 por cento das situações AAPV-IgG positivas que não apresentavam LCL e confirmar 100 por cento dos casos de LCL em atividade clínica. A análise das RVs demonstrou que um resultado positivo na análise combinada praticamente confirma a presença de LCL e que um resultado negativo praticamente confirma a ausência de LCL. Finalmente, foi demonstrada a utilidade da AAPV-IgG no monitoramento precoce e tardio da cura pós-terapêutica específica da LCL. Observou-se que, que 71 por cento dos pacientes sem recidivas após 2 anos do tratamento foram identificados precocemente (30d-PT), com queda na reatividade de PPFP, superior a 10 por cento, na diluição do soro 1:4.096.

Anticorpos antipromastigotas vivas de Leishmania (Viannia) braziliensis, detectados pela citometria de fluxo, para identificaçäo da infecção ativa na leishmaniose tegumentar americana / Anti-live Leishmania (Viannia) braziliensis promastigote antibodies, detected by flow cytometry, to identify active infection in american cutaneous leishmaniasis

Neste estudo, descrevemos etapas iniciais de padronizaçäo de uma nova metodologia para detecçäo de anticorpos antipromastigotas vivas de Leishmania (Viannia) braziliensis, pela citometria de fluxo e a análise de sua aplicabilidade para estudos clínicos. Foram avaliados 39 indivíduos com sorologia convencional (RIFI) positiva para leishmaniose, classificados quanto à ausência/presença de lesäo (L- e L+). Os resultados foram expressos sob a forma de percentual de parasitas fluorescentes positivos (PPFP). A análise dos dados, na diluiçäo 1:1.024, permitiu distinguir 95 por cento dos pacientes L+ como um grupo de alta reatividade (PPFP>50 por cento) e 72 por cento dos indivíduos L- como um grupo de baixa reatividade (PPFP<=50 por cento). A análise dos títulos da reaçäo de imunofluorescência indireta näo demonstrou nenhuma relaçäo com a ausência/presença de lesäo. Em conjunto, nossos dados sugerem a aplicabilidade da citometria de fluxo na identificaçäo dos casos de infecçäo ativa, o que näo tem sido possível através das reaçöes sorológicas convencionais